McCoy's 5A(改良)培养基是一种通用培养基,最初主要为培养诺维科夫肝癌细胞所设计。与其他培养基相比,McCoy's 5A含有还原型谷胱甘肽、细菌蛋白胨以及高浓度的葡萄糖等独特成分。McCoy's 5A适用于多种类型的原代细胞的培养,如来源于骨髓、皮肤、牙龈、肾、脾、肺、大鼠胚胎、网膜等组织的细胞。除用于原代细胞培养以外,McCoy's 5A(改良)培养基还用于组织活检培养、细胞建系,以及一些淋巴细胞和较难培养的细胞的培养,例如:Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29与BHL-100等上皮细胞。该产品还含有汉克斯盐,使其能够在二氧化碳培养箱外使用。McCoy's 5A(改良)培养基使用时需要血清补充,通常添加10%的胎牛血清(FBS)即可。McCoy's 5A(改良)培养基使用碳酸氢钠缓冲系统(2.2 g/L),因此需要5%-10%的二氧化碳环境来维持生理pH值。
本产品生产按照以下基本指标:
含有 | 不含 |
酚红 | 丙酮酸钠 |
L-谷氨酰胺 |
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细菌蛋白胨 |
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HEPES |
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规格
状态: | 液体 |
容量: | 500mL |
糖分水平: | 高糖 |
谷氨酰胺: | L-谷氨酰胺 |
指示剂: | 酚红 |
细菌蛋白胨添加剂: | 细菌蛋白胨 |
丙酮酸钠添加剂: | 无丙酮酸钠 |
HEPES 缓冲液: | HEPES |
运输条件: | 常温 |
存储条件: | 2°C-8°C, 避光 |
保质期: | 12月 |
1、预先进行水浴处理:
在使用之前,需要将培养基在37℃条件下进行水浴处理。
2、注意避免污染:
本产品不含抑菌剂,使用时必须在超净工作台或生物安全柜中进行无菌操作:
(1)在使用培养基以前,请用75%酒精对瓶体进行灭菌消毒。
(2)在无菌操作条件下,加入生长添加剂、抗生素等成分,混匀备用。
(4)在实验操作中,要避免其他液体接触到瓶口以防污染,尤其要注意避免交叉污染。
(5)切记不要在在非洁净区打开瓶盖,避免造成污染。
(6)培养基使用完毕,瓶口应用封口膜密封,避免培养基与空气接触。
3、注意存储与保质期:
(1)本产品的保存必须谨遵说明书所标示的保存温度与存储条件。
(2)产品如果在超过37℃的条件下置放超过一天,不能再继续使用。
(3)超过有效期的产品,请勿使用。
(4)产品如有漏液、混浊、颜色发生变化,请勿使用。
4、注意安全防护:
本产品不含毒性,但为了您的健康以及实验的安全,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1、 问:进行细胞培养时,如何选择特定的培养基?
答:大体上来讲,贴壁培养应当首选DMEM培养基,悬浮培养则应首选RPMI-1640培养基。这两种培养基应用虽然广泛,但不是万能的,有好多的细胞都有其传统惯用的培养基。虽然,特定类型的细胞不一定有严格固定的培养条件。但是,在实际培养过程中,事实表明:特定的细胞是有其最适宜生长的一款或数款培养基的。有时候,细胞生长不好,恰恰是因为没有选择好适宜的培养基。科研工作者如果对自己所培养的细胞应当选用那款培养基没有把握,可以在我们的网站的“细胞专家”中查询。我们会针对您所要培养的细胞给出一个科学的培养方案。
2、 问:什么情况下选择不含酚红的细胞培养基?
答:酚红在培养基中的基本用途表现为指示pH 值:酸性时呈现黄色,中性时呈现红色,碱性则为紫色。除此之外,酚红还具有模拟固醇类激素(特别是雌激素)的作用。在培养哺乳动物细胞时,如果需要避免固醇类反应,可以选用不加酚红的培养基。另外,在做流式细胞检测时,为了避免酚红干扰检测,也可以选用不加酚红的培养基。
3、问: 细胞培养时,为什么要控制渗透压?
答:细胞在生物体内的生存环境都具有特定的渗透压,如人血浆渗透压 290mOsm/kg,这一数值可视为培养人体细胞的理想渗透压。由于细胞必须生活在等渗的环境下,并且对渗透压具有一定的耐受性,所以当细胞脱离生物体进行体外培养时,也要尽量满足其对渗透压的环境要求。对于大多数的哺乳动物细胞而言,渗透压控制在260-350 mOsm/kg 左右的范围内是适宜的。
4、问:如何解决L-谷氨酰胺因其不稳定性所带来的问题?
答:L-谷氨酰胺在细胞培养基中扮演着十分重要的角色,可以作为细胞培养的能量来源参与蛋白质的合成和核酸的代谢,这一过程是通过脱氨基来实现的。L-谷氨酰胺在培养基中不是非常稳定,经过一段时间后会发生降解,其降解率会随着保存温度而发生变化。需要指出的是L-谷氨酰胺的降解会导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性。用户在使用含有L-谷氨酰胺的培养基时,一定要注意因L-谷氨酰胺降解所造成的培养基中可能存在L-谷氨酰胺含量不足以及含有有毒物质的问题。为解决好这一问题,本公司开发生产了一些不含L-谷氨酰胺的培养基,用户在使用时可以根据实验需求自行决定添加L-谷氨酰胺的量,进行即时添加。另外,本公司的某些培养基在配方中选用更为稳定的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(即GlutaMAX)代替L-谷氨酰胺。这些措施都可以有效避免L-谷氨酰胺因容易降解而产生有害物质的弊端,从而更利于细胞的生长。